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        冰凍切片NADH心肌黃酶(NADH-TR)活性染色試劑盒產品說明書(中文版)

        更新時間:2023-05-22  |  點擊率:644

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         冰凍切片NADH心肌黃酶(NADH-TR)活性染色試劑盒產品說明書(中文版)

         

        主要用途

         

         冰凍切片NADH心肌黃酶(NADH-TR)活性染色試劑是一種旨在使人工電子受體染料硝基藍四氮唑NBT,受到NADH心肌黃酶催化還原,產生不溶性紫藍色色素沉淀,來分析冰凍組織樣品中酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心改良傳統方法、成功實驗證明的。主要適用于動物肌肉組織細胞的心肌黃酶活性定性檢測。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定,顯色清晰。

         

        技術背景

         

        心肌黃酶(Diaphorase),又稱為硫辛酰胺脫氫酶(lipoamide dehydrogenase,黃遞酶,二氫硫辛酰胺脫氫酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,二氫硫辛酸脫氫酶(dihydrolipoyl dehydrogenase)等。因早期從豬心肌中提取,產品又呈現熒光的黃綠色蛋白質,故被稱為心肌黃酶。分子量102000110000。NADH心肌黃酶直接和黃素蛋白(Flavoprotein)反應,釋放出氫原子,將氧化型黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)還原為還原型黃素腺嘌呤二核苷酸(FADH2),傳遞氫原子給氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD),而形成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH),作為電子供體,還原人工電子受體,例如染料四氮唑蘭(tetrazolium)化合物,包括硝基藍四氮唑(Nitro Blue Tetrazolium;NBT),產生不溶性甲暨色素,由此用于鑒別動物肌肉組織類型。

         

        產品內容

         

         清理液(Reagent A           毫升

         染色液(Reagent B           毫升

         反應液(Reagent C           毫升

         透亮AReagent D          毫升

         透亮BReagent E          毫升

         透亮CReagent F          毫升

        產品說明書              1

         

        保存方式

         

        保存 染色液(Reagent B)和 反應液(Reagent C在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4冰箱里; 透亮液(Reagent D具有揮發性,注意密閉瓶蓋;有效保證6

         

        用戶自備

         

        1.5毫升離心管:用于工作液配制的容器

        培養箱:用于反應孵育

        中性樹脂:用于切片封片

        光學顯微鏡:用于切片染色后觀察分析

        實驗步驟

         

        染色開始前,將-20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化;移取xx微升 染色液(Reagent B到新的1.5毫升離心管,加入xx微升 反應液(Reagent C,混勻后,標記為 染色工作液,置于冰槽里,避免光照。然后進行下列操作。

         

        1. 取出待測的10微米厚的冰凍組織切片 

        2. 小心加上xx微升 清理液(Reagent A在切片上,鋪滿整個樣品表面

        3. 小心移去切片上的 清理液(Reagent A

        4. 小心加上xx微升  染色工作液,鋪滿整個切片樣品表面

        5. 放進37℃培養箱里孵育30分鐘,避免光照

        6. 小心移去切片上的 染色工作液

        7. 小心加上xx微升 清理液(Reagent A在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

        8. 小心移去切片上的 清理液(Reagent A

        9. 重復實驗步驟68二次

        10. 小心加上xx微升 透亮AReagent D在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

        11. 室溫下孵育5分鐘(注意:根據退色程度,調整孵育時間)

        12. 小心移去切片上的 透亮AReagent D

        13. 小心加上xx微升 透亮BReagent E在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

        14. 室溫下孵育5分鐘(注意:根據退色程度,調整孵育時間)

        15. 小心移去切片上的 透亮BReagent E

        16. 小心加上xx微升 透亮CReagent F在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

        17. 室溫下孵育5分鐘(注意:根據退色程度,調整孵育時間)

        18. 小心移去切片上的 透亮CReagent F

        19. 小心加上xx微升 清理液(Reagent A在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

        20. 小心移去切片上的 清理液(Reagent A

        21. 重復實驗步驟1920二次

        22. 放上蓋玻片或封片(中性樹脂)

        23. 即刻在光學顯微鏡下觀察和計數:

        表達NADH心肌黃酶的組織細胞為陽性組織細胞

        呈現深紫藍I型肌纖維

        淺紫藍色為II型肌纖維

         

        注意事項

         

        1. 本產品為50次操作

        2. 操作時,須戴手套

        3.  反應液(Reagent C避免反復凍融

        4. 陰性對照時, 染色工作液不含有 反應液(Reagent C

        5. 心肌組織可以用于陽性對照

        6. 每次更換試劑溶液時,保持切片面基本晾干

        7. 試劑溶液在切片表面時,避免有氣泡存在,同時確保鋪滿切片表面

        8. 整個操作,在避光狀態下進行

        9. 染色孵育時間,根據樣品和酶活性強弱調整,通常為560分鐘

        10. 使用 透亮液A、B、C時,注意觀察去色變化,切莫過度退色

        11. 透明+封片處理后,可以強化染色

        12. 染色完成后,即刻進行光學顯微鏡觀察

        13. 樣品染色后保存,避免光照

        14. 染色參考圖像見下圖

         

        15. 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產品

         

        質量標準

         

        1. 本產品經鑒定性能穩定

        2. 本產品經鑒定顯色清晰

         

         


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